红阳猕猴桃四倍体诱导及其抗溃疡病特性初探
作者：张弛
猕猴桃是猕猴桃科(Actinidiacea)猕猴桃属(Actinidia)落叶藤本果树。我国是猕猴桃的主要起源中心,种质资源丰富。猕猴桃各种营养物质含量极为丰富,被称为‘水果之王’,并已逐步成为果树产业发展的亮点。但随着猕猴桃栽培规模的扩大,病害种类和危害程度也在不断增加,给猕猴桃生产带来严重威胁。其中,溃疡病是栽培猕猴桃的一种毁灭性的细菌性病害,也无根除的有效办法。
▲zespri goldenkiwifruit
目前对于猕猴桃的研究主要集中在栽培生理、组织培养及药用研究等方面,在多倍体及抗溃疡病新品种选育方面研究较少。本研究以猕猴桃优质红肉品种红阳为材料，建立了组织培养快繁体系,同时利用秋水仙素对其组培无菌苗进行了多倍体诱导研究，获得了四倍体，并对四倍体与二倍体的特征特性及对溃疡病的抗性进行了比较,为最终获得猕猴桃抗溃疡病新品种的选育奠定了基础。
▲红心猕猴桃果园
1.以二倍体红阳猕猴桃茎段为外植体,建立了快繁体系。最佳外植体灭菌方法为:70%乙醇10s,0.1%升汞灭菌4min,无菌水冲洗5次。诱导不定芽分化的最适培养基为WPM+0.6mg/L TDZ+0.1mg/L NAA,诱导率为80%,成芽数为2.0;不定芽最适增殖培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.04mg/L NAA,增殖系数为5.5,植株粗壮,叶色浓绿,愈伤少。最适生根培养基为1/2MS+0.6mg/LNAA,生根率为90%,平均根数为7.9条,植株及根系生长良好。
▲阳光金果SUNGOLD
2.利用秋水仙素溶液,采用浸泡法及混培法对二倍体组培苗进行了多倍体诱导研究。结果表明:0.2%秋水仙素浸泡离体组培苗茎尖48h诱导率较高,诱导率为20%,四倍体诱导率为15%;秋水仙素混培法以20mg/L秋水仙素加入培养基中处理10d诱导效果最好,诱导率为10%,其中四倍体诱导率为5%,浸泡法诱导四倍体的频率比混培法高。经染色体数目鉴定,猕猴桃四倍体染色体条数为2n=4x=116。二倍体最适培养基也较适宜四倍体猕猴桃的增殖等培养,其增殖系数达到4.5,生根率为70%,平均根数为4条,但生根速度较二倍体慢。
▲猕猴桃开花授粉
3.对诱导所得到的四倍组培苗与二倍体进行了特征特性比较。结果表明:四倍体茎增粗,叶片变大增厚,叶色浓绿。四倍体叶长、叶宽、叶厚分别为二倍体的1.18、1.48、1.06倍,叶形指数为二倍体的76.6%;叶绿素含量增加,四倍体叶绿素含量为二倍体的1.82倍。四倍体气孔增大、气孔密度减小、气孔保卫细胞也比二倍体大,四倍体气孔密度为二倍体的52.5%,保卫细胞长度及宽度分别为二倍体的1.45倍及1.33倍。
▲猕猴桃苗
4.对四倍体与二倍体的抗旱性及抗热性进行了比较。结果表明:四倍体的叶片持水力高于二倍体,为二倍体的1.57倍,而细胞膜损伤率及渗透率均低于二倍体,分别为二倍体的36.4%及65.9%,表明四倍体的抗旱性及抗热性均强于二倍体。
5.同工酶活性检测及电泳分析表明,四倍体与二倍体相比,其POD酶活性及SOD酶活性均高于二倍体,其中四倍体POD活性为二倍体的4.5倍,而SOD酶活性为二倍体的2.2倍,但是四倍体没有特异性的酶带,与二倍体的酶带相同。酶活性可以在一定程度上说明四倍体的抗逆性强于二倍体。
6.进行了猕猴桃溃疡病菌株的分离、纯化和病原菌侵染的初步研究。结果表明:通过形态学分析及致病性鉴定,分离纯化后获得了两个菌株,初步认为分离得到的菌株为丁香假单胞菌属猕猴桃致病变种。 对二倍体及10个株系的四倍体组培苗叶片进行了离体侵染,结果表明:二倍体在接种3天后即感病,8个四倍体株系在接种5天后也表现出了感病症状,其余两个四倍体株系未见感病症状。
▲遵义市播宏猕猴桃果园有限公司是西南地区最大的猕猴桃果业公司，种植1200亩高山猕猴桃，是遵义市农业龙头企业，市级先进扶贫企业。其中猕猴桃花粉项目是中国单体面积最大的猕猴桃花粉园，单体采粉园达到了400亩，丰产期产花粉400公斤，提供高品质、高倍体、高活性的猕猴桃花粉，可以满足30000亩果园的花粉需要。联系微信18030405084
